Pari_A
کاربر اخراجی
- عضویت
- 2017/02/27
- ارسالی ها
- 2,766
- امتیاز واکنش
- 14,439
- امتیاز
- 746
استخراج RNA فرآیندی است که طی آن RNA کل موجود در یک نمونه هموژنیزه شده سلولی جدا و تصفیه می‌شود. این روش آزمایشگاهی در بیوتکنولوژی، مهندسی ژنتیک و... کاربرد ویژه‌ای دارد و یکی از پیشنیازهای ضروری در فرآیندهایی همچون PCR و RT-PCR ، نورترن بلاتینگ و دیگر روشها می‌باشد.
مراحل استخراج RNA
روش‌های مختلفی برای استخراج RNA وجود دارد که از میان آنها به روش زیر که طی هفت مرحله انجام می‌شود اشاره می‌گردد.
۱. برداشت بافت
نخستین مرحله از استخراج RNA است که طی آن بافت مرود نظر از میان مجموعه بافتی بدن جدا می‌شود که برای این منظور می‌توان از پروتئازها استفاده نمود. گاهی نیز در محیط آزمایشگاه بافت‌های آماده در ته فلاسک وجود دارند که برای جدا کردن آنها از تریپسین و EDTAA استفاده می‌شود.
۲. همگن سازی
در دومین گام باید RNA و دیگر اجزای سلولی را از محاصره غشایی خارج نموده که بدین منظور باید مجموعه سلولی را تخریب کرده و ترکیبی همگن بدست آورد. RNX-Plus یا Trizol در این مرحله مورد استفاده قرار می‌گیرند.
۳. جداسازی فازها
در این مرحله RNA را از DNA و پروتئین‌های سلولی جدا می‌نمایند. پس از اضافه نمودن کلروفرم به نمونه آنرا تحت شرایط ویژه‌ای سانتریفیوژ کرده که در پایان سه فاز تفکیک شده را حاصل می‌نماید. فاز زیرین مربوط به پروتئین‌ها، فاز میانی مربوط به DNA و فاز رویین مربوط به RNA می‌باشد.
۴. رسوب سازی RNA
در این مرحله پس از انتقال فاز رویین به لوله‌ای دیگر با استفاده ایزوپروپانول و سپس سانترفیوژ RNAA را رسوب می‌دهیم.
۵. شستشوی RNA
ششتشوی رسوب RNA با استفاده از اتانول ۷۵٪ گام پنجم را تشکیل می‌دهد. نکته: در استخراج DNAA شستشو با الـ*کـل ۷۰٪ انجام می‌شود ولی در استخراج RNA با الـ*کـل ۷۵٪
۶. محلول سازی RNA
انحلال رسوب RNA با استفاده از DEPC treated Water ششمین گام از استخراج RNA می‌باشد
۷. تجزیه و تحلیل RNA
آخرین گام سنجش صحت استخراج RNA می‌باشد که از دو طریق اسپکتروسکوپی یا الکتروفورز کمیت یا کیفیت کار مورد ارزیابی قرار می‌گیرد.
مراحل استخراج RNA
روش‌های مختلفی برای استخراج RNA وجود دارد که از میان آنها به روش زیر که طی هفت مرحله انجام می‌شود اشاره می‌گردد.
۱. برداشت بافت
نخستین مرحله از استخراج RNA است که طی آن بافت مرود نظر از میان مجموعه بافتی بدن جدا می‌شود که برای این منظور می‌توان از پروتئازها استفاده نمود. گاهی نیز در محیط آزمایشگاه بافت‌های آماده در ته فلاسک وجود دارند که برای جدا کردن آنها از تریپسین و EDTAA استفاده می‌شود.
۲. همگن سازی
در دومین گام باید RNA و دیگر اجزای سلولی را از محاصره غشایی خارج نموده که بدین منظور باید مجموعه سلولی را تخریب کرده و ترکیبی همگن بدست آورد. RNX-Plus یا Trizol در این مرحله مورد استفاده قرار می‌گیرند.
۳. جداسازی فازها
در این مرحله RNA را از DNA و پروتئین‌های سلولی جدا می‌نمایند. پس از اضافه نمودن کلروفرم به نمونه آنرا تحت شرایط ویژه‌ای سانتریفیوژ کرده که در پایان سه فاز تفکیک شده را حاصل می‌نماید. فاز زیرین مربوط به پروتئین‌ها، فاز میانی مربوط به DNA و فاز رویین مربوط به RNA می‌باشد.
۴. رسوب سازی RNA
در این مرحله پس از انتقال فاز رویین به لوله‌ای دیگر با استفاده ایزوپروپانول و سپس سانترفیوژ RNAA را رسوب می‌دهیم.
۵. شستشوی RNA
ششتشوی رسوب RNA با استفاده از اتانول ۷۵٪ گام پنجم را تشکیل می‌دهد. نکته: در استخراج DNAA شستشو با الـ*کـل ۷۰٪ انجام می‌شود ولی در استخراج RNA با الـ*کـل ۷۵٪
۶. محلول سازی RNA
انحلال رسوب RNA با استفاده از DEPC treated Water ششمین گام از استخراج RNA می‌باشد
۷. تجزیه و تحلیل RNA
آخرین گام سنجش صحت استخراج RNA می‌باشد که از دو طریق اسپکتروسکوپی یا الکتروفورز کمیت یا کیفیت کار مورد ارزیابی قرار می‌گیرد.
